肉的宰后嫩化常见归因于肌原弹性弹性玻纤设计的弄坏，肌原弹性弹性玻纤设计是由内源性淀粉酶质淀粉酶质溶解酶吸附肌原弹性弹性玻纤和生殖細胞骨架淀粉酶质形成的。与两百多年来经常是关注度话题的钙淀粉酶质酶不同的，胱天淀粉酶质酶（caspases）最新被选为感喜欢来看题。胱天淀粉酶质酶在生殖細胞凋亡的执行力环节起着至关最重要的功效，进来caspase-3在去世后淀粉酶质淀粉酶质溶解中的功效是多方便面和繁多的，这样值得买进一点研发。S-亚硝基化应该通过调钙缓解压力、卡路里新陈代谢、淀粉酶质质吸附和生殖細胞凋亡来调吃起来，以及嫩度和持水特性。项目前期研发察觉S-亚硝基化应该上涨依赖相关线粒体的caspase-3级联发生反应，这能够是肌肉群生殖細胞凋亡和鸡肉高质量不同的愿意。caspase-3的研发主要是其与生殖細胞凋亡的相关，殊不知，极少有研发研究方案S-亚硝基化调caspase-3的逻辑。

2024年9月由杭州农产品加工上大学张万刚教援开发团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生态学为该研究提供了亚硝基化体现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文名字一级标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年应响要素：5.7

发表文章用时：2024年9月

老客户单位名称：南京农业大学

设计资料：蛋白

拜谱展示 技能：亚硝基化修饰组学

技術路径：

一、分析最终结果

01.Caspase-3吸附性

现今尚不看不清楚NO对caspase-3的减缓反应会不会归因于NO介导的S-亚硝基化，其他质量浓度梯度方向的GSNO用作外源性NO生产商，以促进caspase-3的体内S-亚硝基化。然而表达，与无GSNO的组对比，100、200和400μM GSNO组的caspase-3活力明显有效调低（图1），与前者报道范文统一。GSNO处里有效调低caspase-3活力的暗藏问题仍尚待体现了。

图1 有差异溶度的GSNO加工处理对caspase-3活性酶类的危害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化水平

分析Caspase-3的亚硝基化阶段，以体现了GSNO对Caspase-3的症状性。经GSNO处理后，检查到caspase-3蛋白质S-亚硝基化标准延长（图2）。这样的以至于证明，外源性GSNO培养出可取得胜利促进caspase-3的身体之外S-亚硝基化。令人感动惊诧的是，在没GSNO会有的对比组中检查到一位衰弱的S-亚硝基化带，这证明caspase-3几率发生了内源性的S-亚硝基化。与此同时，本分析中caspase-3的S-亚硝基化阶段较高，而caspase-3的特女性朋友有效降低，这与以前的分析一样的。以至于，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化遮盖位点尚不知晓，还要求进步的科学探索。

图2 GSNO除理对caspase-3S-亚硝基化品质的作用

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化淡化组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。淡蓝色标示的编码队列写出S-亚硝基化肽，橘红色标示的C写出S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3光降解结球蛋白

结球核血清质用于一类重要的的的体細胞骨架球核血清质，在恢复肌体細胞组成部分的组成部分详细准确性和收拢性上起主要要的效应，探讨S-亚硝基化caspase-3对结球核血清质可分解的比较敏非理性含有重要的的有何意义。与Std（未用胱天球核血清质酶-3和GSNO孵育的缺省肌棉纤维材料球核血清质）组好于，0 μM GSNO组（肌原棉纤维材料和caspase-3的孵育，无GSNO）的详细完正结球核血清质份量有效减小，提示信息caspase-3对结球核血清质含有意向的球核血清质油脂水解程度。在GSNO孵育后，详细完正结球核血清质的份量比较突出新增（P < 0.05）。显然，当GSNO浓硫酸浓度增大时，详细完正结球核血清质的份量长期调涨（P < 0.05）（图5）。这一项发现表示，SNO突显的caspase-3以平均水平依赖感的的方法仰制结球核血清质的可分解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结蛋白酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3可降解肌钙核蛋白-T

肌钙蛋清质酶-T (TnT)是原肌球蛋清质酶调高主要负责肌肉组织收宿的丝条的所需肌原食物仟维蛋清质酶。TnT的生物吸附基本特征是检查到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化要求下，caspase-3对TnT的生物吸附问题右图6如图所示，与Std组（富含caspase-3和GSNO的肌原食物仟维）相对比，caspase-3组中30 kDa TnT段落正相关增添，阐明caspase-3体验了TnT的生物吸附，最后，caspase-3与GSNO的孵育使得30 kDa TnT的较低。在100和200 μM GSNO组相互沒有检查到严重的距离(P > 0.05)，而当GSNO的氧化还原电位达标400 μM 时，该段落正相关较低(P < 0.05)。此类挖掘阐明了SNO遮盖的caspase-3对TnT生物吸附的可抑制作方法用。结蛋清质酶和TnT是caspase-3的敏感度底物，而GSNO清理较低caspase-3的活力将使得肌原食物仟维蛋清质酶生物吸附地步较低。综合上面的上述，NO诱骗的S-亚硝基化可利用遮盖半胱氨酸残基来调高caspase-3的活力，以致进一个步骤决定其对结蛋清质酶和TnT的蛋清质酶蛋白质水解效果，可以决定牛肉片产品质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3生物降解肌钙核蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本研究方案意在探究S-亚硝基化对caspase-3装饰的不良影向以及其那么对鸡肉片肌原玻纤棉身体分解的不良影向。淀粉酶酶质S-亚硝基化也可以装饰caspase-3的半胱氨酸残基，然而从而导致caspase-3催化活性降底，进两步调节了其对鸡肉片肌原玻纤棉淀粉酶酶质的淀粉酶酶质水解反应本事。

三、拜谱总结

实验进行了酶活判断法，亚硝基化掩盖组学概述，WB等判断行为，显示核球蛋清S-亚硝基化应该掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，这造成了caspase-3灵活性的削减，并举一个步骤减弱了其对羊肉肌原人造纤维核球蛋清的核球蛋清电离工作能力。本实验为释疑核球蛋清质亚硝基化对口感的房产调控体系具备了了个新的角度。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的血清质组学、表达血清质组学、分解组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸款型產品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total硫化保存、分散巯基，欢迎大家咨询！

决定性论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663